d-柠檬烯（D-limonene）又称苎烯，是柑橘属果实皮油的主要成分，被美国食品药物管理局（FlA）认定为安全级（CRAS）溶剂，在医药、化妆品、食品等行业被广泛应用。

关于d-柠檬烯在病虫害管理上的应用研究报道也较多，已有研究证明d-柠檬烯对番茄烟粉虱、辣椒烟粉虱、柑橘红蜘蛛、杂拟谷盗、四纹豆象、果蝇类昆虫、柑橘砂皮病、枸杞白粉病等均有较好的生物活性或田间防治效果。胡成云等研究明确5% d-柠檬烯水剂急性经口、经皮和吸入毒性都属于低毒。马卫宾等研究证明，柠檬烯对天然除虫菊素具有一定的增效活性。但关于植物精油d-柠檬烯对化学药剂的增效作用及其机制尚未见报道。因此，本文旨在通过研究d-柠檬烯对吡虫啉的增效作用及其机制，为d-柠檬烯的综合利用提供参考依据。

1  材料与方法

1.1  试验材料

供试昆虫为枸杞棉蚜（Aphis gossypii Glover），采自宁夏银川市西夏区芦花台枸杞地。试验药剂：70%吡虫啉水分散粒剂（深圳诺普信农化股份有限公司生产）；外源助剂：5% d-柠檬烯（怀农特）植物精油（美国奥罗阿格瑞国际有限公司生产），染色剂丽春红-G（北京博奥拓达科技有限公司产品）。

1.2  试验仪器

JK99C全自动张力仪为上海中晨数字技术设备有限公司产品；XB220A型万分之一电子天平，为德国梅勒特-托利多公司生产；Eppendorf移液枪为德国艾本德股份公司产品；CID新型CI-202激光叶面积仪为思爱迪（北京）公司产品；Synergy HTX多功能酶标仪为美国伯腾仪器有限公司产品。

1.3  试验方法

（1）d-柠檬烯对吡虫啉的增效作用

将70%吡虫啉水分散粒剂梯度稀释至700.00、233.33、77.78、25.93、8.64 mg/L，每个浓度取100 mL药液分别添加10 mL d-柠檬烯混匀待用。采用浸虫法测定药剂对枸杞蚜虫的室内毒力。将田间采回新鲜的带有蚜虫的枸杞嫩梢，剔除多余蚜虫，保留大小基本一致的无翅健康枸杞成蚜；然后将其在药液中浸渍5 s，取出晾干后，放入垫有滤纸的直径为9 cm的培养皿中，培养皿加水保湿（每皿加3滴水为宜），每处理重复3次，每重复蚜虫约30头。处理后将培养皿放入MLR-352H-PC培养箱中，设置温度（25±0.5）℃，相对湿度60%，光照周期为L//D=16h//8h的光照气候箱，24 h后检查各处理死亡虫数，并用Abbott公式计算各个处理的死亡率和校正死亡率。以增效比计算添加d-柠檬烯后吡虫啉药液的增效情况。

（2）d-柠檬烯对吡虫啉药液的表面张力影响

采用铂金板法测定药液表面张力。将70%吡虫啉水分散粒剂稀释至140 mg/L，取100 mL药液，添加30 μL d-柠檬烯混匀待测。每处理重复5次，取其平均值。

（3）d-柠檬烯对药液在枸杞叶片上最大持留量的影响

用叶面积测量仪测定枸杞叶片面积（S），用万分之一电子天平称取叶片质量（药前叶片质量）后放入药液中浸泡5 s取出，待无液滴下落时再次称其质量（药后叶片质量），计算药液最大持留量（R_m）。重复10次，结果取平均值。

（4）d-柠檬烯对吡虫啉药液在枸杞叶片上沉积量的影响

以丽春红-G作为指示剂，建立丽春红-G标准曲线。称取立春红-G 1 g溶于1 000 mL的容量瓶中，配得1 000 μg/mL浓度溶液，以此为母液1，配制50 μg/mL浓度溶液，即母液2。从母液2中分别取1、2、3、4、5 mL溶液于25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容即得2、4、6、8、10 μg/mL浓度的溶液。用酶标仪在510 nm的波长下进行测定，分别测得各浓度的吸光。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

将丽春红-G配制成280 mg/L的液体作为溶剂。将70%吡虫啉水分散粒剂稀释至140 mg/L，取100 mL药液，添加30 μL d-柠檬烯混匀待用。以不添加d-柠檬烯的同浓度吡虫啉药液为对照，以蒸馏水为清水对照。用直径为7 mm的打孔器在枸杞叶片上打孔，将所得圆形叶片每10片为1个处理，分别放入各待测溶液中，30 s后取出，待药液不滴落时，将叶片放入蒸馏水中冲洗3遍，并定容至10 mL。用酶标仪在510 nm的波长下测定各处理的吸光值。利用丽春红-G光密度标准曲线求出不同处理洗脱液的浓度，最后求出沉积量。

2  结果与分析

2.1  d-柠檬烯对吡虫啉的增效作用

室内毒力测定表明，未添加助剂时70%吡虫啉水分散粒剂对枸杞棉蚜的LC₅₀为57.474 6 mg/L，添加0.1%植物精油d-柠檬烯后70%吡虫啉水分散粒剂对枸杞棉蚜的LC₅₀为3.957 5 mg/L，说明添加植物精油d-柠檬烯后对吡虫啉具有显著的增效作用，增效比达93.11%（表1）。

表1  d-柠檬烯对吡虫啉的增效作用

2.2  d-柠檬烯对吡虫啉的增效机制初探

采用铂金板法测定药液表面张力值，未添加助剂时70%吡虫啉水分散粒剂5 000 倍液表面张力值为61.5 mN/m，添加0.1%植物精油d-柠檬烯后70%吡虫啉水分散粒剂5 000倍液的表面张力为28.1 mN/m。结果表明，添加植物精油d-柠檬烯后药液的表面张力显著降低。

药液在枸杞叶片上最大持留量测定结果表明，未添加d-柠檬烯处理药液在枸杞叶片上的最大持留量为2.999 6 mg/cm²，添加0.1%植物精油d-柠檬烯后药液在枸杞叶片上的最大持留量为3.030 0mg/cm²，添加植物精油d-柠檬烯后药液最大持留量增加了1.01%，即添加植物精油d-柠檬烯会提高吡虫啉药液在枸杞叶片上的持留量。

以丽春红-G作为指示剂，建立丽春红-G质量浓度与吸光度值的标准曲线为y=0.030 1x-0.006 5，相关系数R²=0.965 0。测定出未添加助剂处理沉积量为28.214 5 μg/cm²，添加助剂处理沉积量为35.987 9 μg/cm²，药液沉积量增加了27.55%，表明添加植物精油d-柠檬烯后可显著增加药液在叶片上的沉积量（表2）。

表2  d-柠檬烯对吡虫啉药液表面张力、最大持留量和沉积量的影响测定结果

3  小结与讨论

室内毒力测定结果表明，添加植物精油d-柠檬烯后对吡虫啉具有显著的增效作用，增效比达93.11%。试验测定，添加植物精油d-柠檬烯后吡虫啉药液的表面张力降低了54.31%，在枸杞叶片上的最大持留量提高了1.01%，沉积量增加了27.55%。初步探明，d-柠檬烯是通过降低药液表面张力，增加药液在叶片上的最大持留量和沉积量，发挥增效作用。

在试验过程中，d-柠檬烯添加量均为固定值，建议后期设置不同添加量。开展田间喷雾试验，测定添加该助剂后药剂在不同作物叶片上的沉积量及对害虫的田间防治效果，以期筛选出植物精油d-柠檬烯在不同类型药剂对靶标病虫害防治过程中的理想添加剂量，为d-柠檬烯的综合利用提供参考依据，充分发挥植物精油d-柠檬烯在减少化学农药用量方面的积极作用。

来源：王芳, 刘畅, 何嘉, 张蓉. 植物精油d-柠檬烯对吡虫啉增效作用及其机制. 中国植保导刊, 2019(11): 23-25; 58